Περιοριστικές ενδονουκλεάσες

Abstract

Οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες είναι ένζυμα βακτηριακής προέλευσης που έχουν τη δυνατότητα να διασπούν το δίκλωνο DNA σε συγκεκριμένες θέσεις. Η ανακάλυψή τους από τον Werner Aber το 1965 έφερε επανάσταση στη μοριακή βιολογία επιτρέποντας την ανάπτυξη των τεχνικών του ανασυνδυασμένου DNA. Οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες χρησιμοποιούνται ευρέως στο εργαστήριο αν και η ανάπτυξη νέων μεθόδων έχει υποκαταστήσει τη χρήση τους σε ορισμένες περιπτώσεις. Η κλωνοποίηση τμημάτων DNA σε φορείς, η δημιουργία βιβλιοθηκών και η μελέτη πολυμορφισμών μήκους θραυσμάτων περιοριστικών ενδονουκλεασών (RFLPs) αποτελούν μερικές από τις εφαρμογές τους. Στο πρακτικό μέρος του κεφαλαίου εξηγείται ο τρόπος σχεδιασμού της αντίδρασης γονοτύπησης του πολυμορφισμού rs1726866 του γονιδίου TAS2R38 με τη βοήθεια περιοριστικής ενδονουκλεάσης και δίνονται οδηγίες για την πραγματοποίηση της αντίδρασης στο εργαστήριο

Restriction endonucleases are enzymes of bacterial origin that have the ability to cleave double-stranded DNA at specific sites. Their discovery by Werner Arber in 1965 revolutionized molecular biology by enabling the development of recombinant DNA techniques. Although widely used in laboratories, the development of new methods has in some cases replaced their use. Cloning of DNA fragments into vectors, creation of libraries, and the study of restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) are some of their applications. In the practical part of the chapter, the design of a genotyping reaction for the rs1726866 polymorphism of the TAS2R38 gene using a restriction endonuclease is explained, along with instructions for performing the reaction in the laboratory.