Χρωματογραφία διήθησης σε πηκτή

Abstract

Η χρωματογραφία διήθησης σε πηκτή αποτελεί σημαντική μέθοδο διαχωρισμού πρωτεϊνικών μορίων βάσει του μεγέθους τους. Μίγμα των προς διαχωρισμό μορίων τοποθετείται στην κορυφή στήλης που πληρούται με πορώδες υλικό και τα μόρια μετακινούνται κατά μήκος της στήλης είτε με την επίδραση της βαρύτητας, είτε με υποβοήθηση εξωτερικής δύναμης (pumping). Ο όγκος του δείγματος διατηρείται κατά το δυνατόν ελάχιστος. Τα προς διαχωρισμό μόρια αναλόγως του μεγέθους τους μετακινούνται μεταξύ των κόκκων του υλικού πλήρωσης ή διαμέσου αυτών (περνώντας από το εσωτερικό τους) προς το κάτω άκρο της στήλης. Τα μεγάλου μοριακού μεγέθους συστατικά προπορεύονται και εκλύονται σε μικρότερους χρόνους από τα μικρότερα, που διατρέχουν δαιδαλώδεις διαδρομές διαμέσου των κόκκων του υλικού πλήρωσης. Έτσι πραγματοποιείται εξαιρετικής απόδοσης διαχωρισμός.

Size exclusion chromatography is a significant method for separating protein molecules based on their size. A mixture of molecules to be separated is loaded onto the top of a column filled with porous material, and the molecules move along the column either under gravity or with the assistance of an external force (pumping). The sample volume is kept as minimal as possible during this process. Molecules move through or between the beads of the packing material towards the bottom of the column according to their size. Larger molecules elute earlier and faster, as they pass through the void spaces between the beads, while smaller molecules traverse more convoluted paths through the packing material. This results in highly efficient separation.